星形膠質細胞活化與疼痛行為的關系
三
趙？紅色？姜呢？孫？錢？孫辛亞飛？劉鳳玉？史玉順？萬？有△
(北京大學神經科學研究所，神經科學教育部重點實驗室神經生物學部，北京100083)
抽象？目的:研究L5脊神經結紮模型大鼠脊髓星形膠質細胞活化與疼痛行為的關系。方法:
44雄性SD大鼠180 ~ 220？g，隨機分為4組:假手術組，脊神經結紮1天，3天和7天分別。
馮的行為使用？弗雷。毛測量大鼠在上述時間點50%足收縮閾值的變化(？n？=?8)?，星形細胞
用免疫組織化學方法觀察其特異性標記物GFAP(？n？=?3)?。結果:？(1)脊神經結
結紮後1天，動物出現機械性疼痛超敏反應。疼痛行為在第3天和第7天是穩定和持續的；假手術組無明顯變化。
(2)術後65±438天，結紮側脊髓背角星形膠質細胞被激活。在第3天和第7天觀察到星形膠質細胞的強烈激活。
反應，假手術組也可以看到輕微的激活。(3)脊神經結紮後，星形膠質細胞被激活，激活程度與脊神經結紮相似。
痛苦行為的產生和維持是密切相關的。結論:脊髓背角星形膠質細胞的激活可能在神經病理性疼痛中發揮作用。
使用。
關鍵詞？星形膠質細胞；膠質酸性蛋白；神經病理學疼痛；脊神經結紮
那個？關系？之間？那個？SP？INAL？星形細胞？激活？然後呢。神經2
病態？爸？在？行為？跟隨？ING？脊椎？神經？l？IGATION
趙？弘，？j？昂？Yu2Qiu，？孫？錢呢？孫？Yan2Ni，？l？IU？風語，？噓？我？Yu2Shun，？萬？妳們
(神經科學？研究？研究所？然後呢。部門？神經生物學？北京大學？鑰匙？實驗室？forNeu2
羅斯西恩？部長？的？學歷，？北京？100083)
抽象？目標:？去哪？調查？那個？關系？之間？那個？sp？inal？星形細胞？激活？然後呢。神經2
病態？痛苦？行為？在？L5？sp？inal？神經？結紮？(?SNL)？老鼠。？方法:？44?男的？SD？老鼠？曾經是。隨便地
分了？變成？4?團體？s:？假的？SNL？1?d，？SNL？3?d？然後呢。SNL？7?d？團體？s？動物力學？異常疼痛？是
代表？反感？被誰？50%?爪子？戒斷？門檻？(50%?PWT)？那是什麽？評估？用什麽？馮？弗雷。細絲？(?n
=?8).？使用？免疫組織化學？手法，？GFAP？曾經是。檢查過？去哪？評價？那個？激活？的？astro2
細胞？(?n？=?3).？結果:？(1)?那個？機械？異常疼痛？的？那個？向左？hind？爪子？出現了？開？日？1?之後？SNL，
然後呢。持續不斷？存在過？從哪裏？日？3?去哪？日？7.？沒有嗎？意義重大？改變？機械的？異常疼痛？曾經是。觀察
在？假的？團體。？(2)?在？那個？ip？側邊？(?病變？側)？腰椎？背面？霍恩？GFAP？免疫活性是什麽？ob2
送達？在哪裏？日？1.？這個？善良？的？星形細胞？激活？維護？激烈？在哪裏？日？3?然後呢。7,?但是呢？答？輕微？程度
的？星形細胞？激活？曾經是。觀察到的？在？假的？團體。？(3)?星形膠質細胞？曾經是。激活？在？那個？sp？inal？軟線？在
SNL？老鼠？那個？學位？的？星形細胞？激活？相關？好吧。那個？發展？然後呢。保養？的？neu2
ropathic？痛苦。？結論:？星形細胞？激活？在？那個？sp？inal？背面？號角？可能嗎？p？躺著？答？角色？在？神經病的
痛苦。
鑰匙？文字？星形膠質細胞；？膠質？纖維狀的？酸性？p？蛋白質？(GFAP)？；？神經病？痛苦；？Sp？inal？神經？結紮
(?SNL)
3?國家自然科學基金委員會(30330230，30570566)和北京自然科學基金(7052039)
△通訊作者
中國疼痛醫學雜誌？日記？的？止痛藥？2007,?13,?(1)?39
& amp復制；？1994-2007?中國？學術？日記？電子？出版？房子。？全部？權利？保留。？ki.net
神經病理學疼痛(？神經病？疼痛)是指中樞或外部。
周圍神經系統損傷或疾病引起的疼痛綜合征，具有自發性
性疼痛(？自發的？痛苦)？痛覺過敏(？痛覺過敏)
和痛覺過敏(？異常性疼痛)的特征是。近年來，膠質細胞
激活成為疼痛研究領域的新亮點[？1?]?。在這個實驗中，使用L5
脊神經結紮(？sp？inal？神經？結紮嗎？作為神的老鼠
通過病理性疼痛模型，測定SNL大鼠機械痛敏感性的變化
以及脊髓背角星形膠質細胞的激活。
探討神經病理痛大鼠和動物疼痛中星形膠質細胞的活化
對於之間的關系。
材料和方法
1.？動物分組和模型制備
雄性SD大鼠由北京大學醫學部實驗動物中心提供。
對，體重150 ~ 180？g .他們被隨機分為4組，分別是假手。
運營組，SNL？1?天啊SNL？3?天河SNL？7?日組。每組11
只有8個是用於行為測試的。3僅用於免疫組織化學。
學習分析。
據金說？而鐘[？2?]制作SNL的方法？模型。大的
大鼠暴露於水合氯醛(300？毫克/千克，？我？p？)麻醉後，放在腹部。
位置，背部切開皮膚，鈍性分離左側椎旁肌，暴露L5。
用6號絲線紮緊脊神經，止血、縫合、註射。
青黴素可以防止感染。假手術大鼠的操作與手術大鼠相似。
壹樣，但沒有神經結紮。
2.？動物機械疼痛敏感性的測定
新聞記者？蘭等等[？3?】報道“漲？然後呢。向下”方法，使用
馮？弗雷纖維(？Stoelting Company，USA)用於測量大鼠的後足。
50%足部收縮閾值。15?g是可通過該方法測定的最大50%收縮率。
腳門檻？0.？25?g是通過該方法確定的最小50%收縮閾值。
腳收縮50%的閾值小於4時？g被認為是疼痛敏感性。術前和
1天、3天、7天後，假手術組和手術組各取50%進行測量。
足部收縮閾值。
3.？免疫組織化學實驗
在1天、3天和7天之後，10%水合氯醛(300
毫克/千克，？我？p？麻醉後開胸，進行左心室灌註。拿
腰椎腫脹段在恒冷切片機上連續切片，切片厚度為14。
微米.
將脊髓切片水合，滅活內源性過氧化氫酶，密封
親近，加入GFAP？多克隆抗體(Dako公司)？1?:?750,
4℃過夜後，生物素標記的二抗(？SP29001，
中山)？辣根過氧化物酶標記的鏈黴親和素(？SP29001，
中山)？，3後，？3'2聯苯二胺(DAB)的顯色及梯度脫醇。
水，二甲苯透明，密封並在顯微鏡下拍照。
4.？統計處理
行為50%的動物腳底按上述公式計算
足部收縮閾值，免疫組化Metamorph軟件用於研究結紮側。
分析脊髓背角淺層的平均灰度值，並選取每個脊髓標本
取5個切片，求出它們灰度的平均值。數據統計分析
用棱鏡？4.？0軟件，結果是平均標準誤差。
(刻薄？s？e？m)？快遞。采用單因素分析各組數據間的差異。
方差分析(壹？方式？ANOVA)其次是鄧尼特的？post2
Hoc測試，用p？& lt？0.？05作為檢驗標準。
結果
1.？脊神經結紮後，大鼠左側足底50%的足收縮為閾下收縮。
秋天
脊神經結紮後1天，大鼠結紮側50%的足底收縮。
閾值明顯低於術前基礎值，即動物出現機械性。
痛覺過敏？在3天和7天之後，疼痛行為是穩定和持續的(與
與術前正常動物相比，P？& lt？0.？01)?。假手術組動物足
50%縮足閾值與術前基礎值相比(與手術相比)無顯著變化
與正常動物相比，P？& gt？0.？05，如圖1)？。
圖1？大鼠脊神經結紮後機械痛覺過敏的變化。術後7天內，假手術量大。
大鼠和SNL模型大鼠結紮側足50%收縮閾值的變化。
3?三
:?p？& lt？0.？01，與術前正常對照組相比。
圖？1 actile？異常疼痛？在？老鼠？之後？SNL。？那個？改變？的？50%?手
戒斷？門檻？(50%?PWT)？在？假的？然後呢。SNL？老鼠？內？7?幾天。
3?三
:?p？& lt？0.？01,?對比？去哪？那個？p？re2operation？控制
2.？免疫組織化學方法顯示脊髓背角GFAP染色。
加深，膠質細胞激活。
利用免疫組織化學染色(DAB)的方法，我們觀察到假
外科(？Sham)和脊神經結紮後的1？d？(?SNL？1d)？,?3?d
(?SNL？3d)和7？d？(?SNL？7d)星形膠質細胞。
(見圖2A和2B)？。從圖中可以看出，SNL？1?d
40 ?中國疼痛醫學雜誌？日記？的？止痛藥？2007,?13,?(1)
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結紮脊髓後角的GFAP染色強於假手術組。SNL？三
d和SNL？7?d？與假手術組相比，GFAP染色明顯增強。
也就是神經損傷後的1？星形膠質細胞被激活。三
d和7？星形膠質細胞反應強烈；未封閉側
星形膠質細胞沒有發生這種變化。假手術組也可見。
結紮側脊髓背角星形膠質細胞輕度活化。
我們測量了結紮側脊髓背角淺層的平均灰度值。
分析，用這個值來表示星形膠質細胞的激活程度(見圖
2C)？。脊神經結紮後1天，星形膠質細胞興奮。
活下去，？3?天河七號？日，星形膠質細胞的活化程度逐漸增加。
另外。
圖二？免疫組織化學染色顯示脊神經結紮後不同時間點脊髓背角GFAP染色的變化。(壹)脊神經結紮後1？d、3？d和7？脊髓三維GFAP免疫組織化學染色
顏色。尺度？酒吧？=?100微米.(b)是圖(a)結紮側脊髓背角的放大圖。尺度？酒吧？=?50微米.(c)如圖(a)所示，量化結紮側脊髓背角淺層的平均灰度值
分析。
3?三
:?p？& lt？0.？01,?與假手術組相比
圖？2?GFAP？免疫反應性？在？那個？sp？inal？背面？號角？之後？sp？inal？神經？結紮。？(壹)？免疫染色？的？GFAP？在？那個？sp？inal？背面？號角？在哪裏？幾天？1,?三
然後呢。7?之後？SNL。？尺度？酒吧？=?100μm？(B)？兩個2倍？更高的城市化？在？(壹)？。？尺度？酒吧？=?50μm？(三)？量化？的？壹般？強度？在？這
膚淺？層次？的？那個？ip？側邊？sp？inal？背面？號角？作為？顯示？在？(壹)？。
3?三
:?p？& lt？0.？01,?對比？用什麽？那個？假的？組
討論
1.？星形膠質細胞的激活與神經病理性疼痛行為
之間的關系
中樞神經系統中的星形膠質細胞執行許多功能。
功能，如參與血腦屏障的形成，調節細胞外離子和神經傳遞。
質量濃度，保持胞外pH值的穩定等。許多刺激
可激活星形膠質細胞，如神經損傷、炎癥、神經系統
感染和各種引起疼痛的因素。星形膠質細胞活化後，
發生了壹系列的變化，如增生、肥大、GFAP合成增多等。
並增加促炎因子的釋放。1994,?加裏森等人[？4?]
通過免疫組織化學技術發現，在坐骨神經壓迫模型中
星形膠質細胞被激活，如果使用MK2這種藥物？801阻止
異常的疼痛傳導也能阻斷膠質細胞的激活，膠質
細胞激活和放大疼痛之間有很強的相關性
它將神經膠質細胞與疼痛聯系起來。後來，隨著研究的深入
隨著研究的深入，人們逐漸發現膠質細胞存在於許多疼痛模型中。
被激活[？5~7?]?。在這個實驗中，我們結紮了脊髓神經。
對星形膠質細胞在不同時間點的反應進行了壹系列觀察。
發現脊神經結紮後1天出現星形膠質細胞。
為了激活？在第3天和第7天，星形膠質細胞受到強烈刺激。
現場反應。星形膠質細胞的激活主要發生在結紮側。
脊髓背角、未束縛側和脊髓前角未見星形膠質細胞。
激活。這與文獻中的報道壹致。神經損傷後，
星形膠質細胞在神經投射區被激活[？8,?9?]?。
脊髓是把疼痛的信息從外周傳遞到大腦的中繼站，並把它傳遞出去。
痛覺初級傳入神經元的軸突末梢終止於脊髓背角。
在不同的水平上，它發生在不同類型的脊髓次級神經元上。
接觸。其中中等直徑有髓Aδ纖維和小直徑無髓纖維。
鞘C纖維終止於脊髓背角淺層[？10?]?這兩種纖維起中介作用。
有害信息的傳播。因此，脊髓背角的淺層被認為是
與疼痛傳遞有關的部分。星形膠質細胞出現在這裏。
中國疼痛醫學雜誌？日記？的？止痛藥？2007,?13,?(1)?41
& amp復制；？1994-2007?中國？學術？日記？電子？出版？房子。？全部？權利？保留。？ki.net
激活表明這些細胞可能參與了有害信息的傳遞。
脊神經結紮後1天，動物出現明顯的機械性疼痛。
敏？動物在第3天和第7天保持高水平的疼痛敏感性。錯誤的
手術組無明顯行為改變。星形膠質細胞的激活
肝也發生在脊神經結紮後65438±0天。3天和7天，已激活
學位呈上升趨勢。脊髓中的神經膠質細胞包括星形細胞。
膠質細胞和小膠質細胞。根據現有的文獻報道[？11?]?，山脊
神經結紮後小膠質細胞不激活或輕度激活，小膠質細胞
細胞質抑制劑不能逆轉既定的疼痛行為；那顆星星呢
成膠質細胞在脊神經結紮後具有強烈的激活反應，
並平行於疼痛行為的發生和維持，提示星形膠質細胞。
細胞可能參與疼痛行為的形成。小膠質細胞和恒星
膠質細胞在疼痛中扮演不同的角色，目前的觀點認為
啟動星形膠質細胞的激活以激活小膠質細胞，
然而，星形膠質細胞的激活程度與放大痛的產生有關
保持相關性[？12?]?。星形膠質細胞與疼痛行為的產生和維度
持續性的整個過程是與星形膠質細胞有關還是只是暫時的
細胞的激活是因還是果？簡單星形膠質細胞的激活。
活體動物是否能誘發痛覺敏感，還需要通過實驗進壹步驗證。
2.？星形膠質細胞在神經病理性疼痛中的可能意義
星形膠質細胞和神經元之間有著密切的關系，它們是相互對立的。
神經元周圍微環境的變化非常敏感，可以很快逆轉。
是的。反應性膠質細胞可以釋放大量的神經活性物質。
定性和促炎因子，可增加初級傳入神經末梢。
尖端疼痛遞質的釋放和痛覺傳遞神經元興奮性的增加
擴大疼痛傳遞並與神經元形成反饋回路。
路[？13?]?。這表明神經膠質細胞已經不在中樞神經系統中了
壹種靜態成分，但與神經元不同。
打斷信息交換的動態過程。神經膠質細胞通過神經膠質網絡
側枝傳遞信號，從而與神經元互補，共同參與痛覺傳遞。
導遊。更深入地了解膠質細胞與疼痛的關系將有助於研究。
治療慢性疼痛的藥物提供了新的靶點。